Objectifs du tutoriel
Ce tutoriel propose un ensemble d’outils et de conseils relatifs à la surveillance environnementale des microalgues associées à la ciguatéra.
Assemblage, déploiement et collecte des window-screens (ou substrats artificiels)
Les « Window screens » (WSs) sont des dispositifs d’échantillonnage passif de cellules de microalgues benthiques. Ce sont des dispositifs peu coûteux, simples de conception et faciles d’utilisation. Les vidéos ci-après détaillent les modes d’assemblage, de déploiement et de collecte des WSs in situ.
Collecte des macroalgues (substrats naturels des dinoflagellés associés à la ciguatéra)
La vidéo ci-après illustre le mode de collecte des échantillons de macroalgues.
Traitement et fixation des échantillons de window-screens et de macroalgues
Les vidéos ci-après détaillent les modes de traitement et de fixation des échantillons de window screens et de macro-algues, selon la nature des analyses auxquelles ils sont destinés.
Identification et dénombrement des cellules de dinoflagellés en microscopie optique
MATÉRIEL REQUIS
- 1 microscope inversé muni d’objectifs x10, x20, x40, x100 et d’une caméra digitale
- Chambre de comptage de type « Sedgewick Rafter Cell » (à défaut, utiliser des lames et lamelles de verre)
- Micropipette (P1000) et pointes adaptées
- 1 compteur manuel
OBSERVATION DES ECHANTILLONS AU MICROSCOPE
- 1- Retourner plusieurs fois le tube contenant l’échantillon pour bien remettre en suspension les cellules
- 2- Déposer l’équivalent d’1 ml d’échantillon dans la chambre de comptage à l’aide de la micropipette
- 3- Observer l’échantillon au microscope
- 4- Dénombrer les cellules en faisant défiler la chambre de comptage de droite à gauche et de haut en bas afin de balayer tout le champ.
- 5- Identifier les différentes espèces présentes à l’aide du cours sur l’identification des micro-algues benthiques associées à la ciguatéra accessible ci-dessous.
- 6- Réaliser au moins 3 comptages/échantillon pour déterminer une densité cellulaire moyenne
NB: si vous ne disposez pas d’une cellule de Rafter, l’observation des échantillons peut s’effectuer entre lames et lamelles, sur des aliquots de 100 µl d’échantillon.
Cours d’introduction aux micro-algues benthiques nuisibles (bHABs)
Module 1
Bref aperçu des HABs- Impacts nuisibles– Espèces en cause– Introduction générale à la taxonomie des dinoflagellés (course en anglais)
Module 2
Introduction générale aux micro-algues benthiques nuisibles (bHABs) présentes dans le Pacifique Sud: Gambierdiscus (cours en anglais)
Module 3
Introduction aux genres Ostreopsis et Coolia (cours en anglais)
Module 4
Introduction au genre Prorocentrum et aux dinoflagellés nus (Amphidinium) (cours en anglais)
Calcul des densités cellulaires de dinoflagellés présents dans les échantillons
Calculer le nombre de cellules à partir d’échantillons de macro-algues
Télécharger le tableur Excel avec les formules
Calculer le nombre de cellules à partir d’échantillons de window screens
Télécharger le tableur Excel avec les formules
Pour en savoir plus sur les techniques d’échantillonnage des dinoflagellés benthiques